公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

CM-R020大鼠上皮細胞培養基100mL 大鼠去乙酰化饑餓激素(dGHRL)ELISA試劑盒 PI3K(Mouse Phosphotylinosital 3 kinase)  小鼠0酸肌醇3激酶 96T

phospho-NIFK (Thr238)： 0酸化NIFK抗體 大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106

人脈絡絲成纖維細胞 (HCPF)( 5×105 ) HUVEC, 人臍靜脈內皮細胞 Caco-2，人結直腸腺癌細胞 大鼠去甲(NE)ELISA試劑盒 MUC5B(Human mucin-5 subtype B)  人粘蛋白/粘液素5B 96T

phospho-NIFK (Thr230)： 0酸化NIFK抗體 兔角膜后基質層成纖維細胞;RCBBF

IL17A Protein Marmoset 重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白 大鼠去甲(NE)ELISA 試劑盒 ITF(Human Intestinal trefoil factor)  人腸三葉因子 96T

Rabbit Anti-IgG heavy chain constant region： 兔抗人γ-鏈 0.1ml

Rhesus antibody Rh CK6 細胞角蛋白6抗體 肝動脈內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白 (Fc 標簽) 人5,10亞甲基四氫還原酶(MTHFR)ELISA試劑盒 DISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT) DISC1 C端抗原 0.5mg

IGSF9B： 免疫球蛋白超家族成員B抗體 DUSP3 Others Human 人 DUSP3 / VHR 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人大隱靜脈內皮細胞培養基 100mL 人4羥基壬烯酸(4-HNE)ELISA試劑盒 DR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受體(抗原) 0.5mg

OKT11小鼠雜交瘤（抗CD2）細胞Repetin： 中間絲相關蛋白抗體 人支氣管上皮樣細胞;BEAS-2B

CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠癌胚抗原(CEA)ELISA試劑盒 MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1)  人基質金屬蛋白酶1 96T

RNF86： 環指蛋白86 0.2ml

Rhesus antibody Rh MMRN1/ECM 內皮細胞MMRN1蛋白抗體 CST7 Others Human 人 Cystatin-F / CST7 / Cystatin-7 人細胞裂解液 (陽性對照)

造骨細胞生長添加物ObGS 大鼠癌標志物-CA153ELISA 試劑盒 Flt3(Human FMS-like tyrosine kinase 3)  人FMS樣酪酸激酶3 96T